BL21 Star (DE3) pLysS Chemically Competent Cell 

大腸桿菌化學感受態(tài)細胞

產(chǎn)品標簽：

BL21 Star (DE3) pLysS；Rosetta (DE3)；BL21 (DE3)；表達感受態(tài)細胞；pET表達載體；IPTG誘導；非毒性蛋白表達；

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【好消息】：見我司整理的BL21系列表達感受態(tài)細胞常見問題。

產(chǎn)品組分：

菌株描述

BL21 Star (DE3) pLysS菌株來源于BL21(DE3)菌株。DE3命名表明該菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體（其上攜帶lacUV5啟動子調(diào)控的T7 RNA聚合酶基因），IPTG用來誘導T7 RNA聚合酶的表達。該菌株含突變的rne基因（rne131），編碼合成截短的RNase E，此酶喪失mRNA水解能力從而提高mRNA轉(zhuǎn)錄體的穩(wěn)定性并增加異源蛋白產(chǎn)量。作為大腸桿菌B/r菌株，不含有l(wèi)on蛋白酶和缺乏外膜蛋白酶OmpT，降低了外源蛋白的降解。

BL21 Star (DE3) pLysS菌株攜帶pLys質(zhì)粒，具有氯mei素抗性（CamR）。含有表達T7溶jun酶的基因，T7溶jun酶能夠作用于大腸桿菌細胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，從而能夠降低目的基因的背景表達水平，但不干擾IPTG誘導的表達。pLys質(zhì)粒還含有p15A復制起始子，這一起始子使其兼容于pUC或pBR322來源的質(zhì)粒。

BL21 Star (DE3) pLysS菌株特別設計適用于高拷貝、T7啟動子表達載體（比如pRSET T7載體）的非毒性蛋白的高水平表達。與BL21菌株相比，BL21 Star菌株由于提高的mRNA穩(wěn)定性，呈現(xiàn)出更高的異源基因基礎表達，因此不適合毒性蛋白表達。然而，BL21 Star (DE3) pLysS菌株比BL21 Star菌株表達更低。

BL21 Star (DE3) pLysS菌株基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm rne131(DE3) pLysS (CamR)

產(chǎn)品描述

本品是大腸桿菌BL21 Star (DE3) pLysS菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達107 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

保存與運輸條件

保存：-80℃保存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1）   感受態(tài)細胞必須用干冰運輸。感受態(tài)細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。

2）   最好在冰上融化感受態(tài)細胞。

3）   進行轉(zhuǎn)化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。

4）   為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到zui低。

5）   產(chǎn)品包裝內(nèi)含質(zhì)粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用。

6）   BL21 Star (DE3) pLysS菌株攜帶pLysS質(zhì)粒，除復蘇培養(yǎng)基不含抗生素之外，其他所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)液都應含有氯mei素（34μg/ml），以防止質(zhì)粒丟失。

7）   為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1）  從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA，用手輕彈管底輕輕混勻，冰浴靜置25min。

2）   42℃熱激45s，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3min。此過程不要搖動離心管。

3）   向每個離心管中加700 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養(yǎng)60min，目的使質(zhì)粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

4）   低速離心收菌（比如4000rpm，2min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含氯mei素（34μg/ml）以及所選質(zhì)粒篩選抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16h。

【注意】：

a）涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，則通過離心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。

b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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