DiI (DiIC₁₈(3)) 細胞膜橙紅色熒光探/神經(jīng)元示蹤研究

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產(chǎn)品描述：

DiI, DiO, DiD和DiR作為一類長鏈的親脂性二烷基碳菁類染料（Dialkylcarbocyanines）熒光染料家族，用于標記細胞膜以及其他脂溶性生物結構。作為一類環(huán)境敏感型熒光染料，當它們與膜結合或者與親脂性生物分子（例如蛋白質，雖然在水中其熒光強度很弱）結合時，其熒光強度顯著增強。一旦進入細胞后，它們在細胞內(nèi)質膜中逐步擴散，于家濃度條件下可將整個細胞均勻染色。這些染料具很高的淬滅系數(shù)，偏光依賴性和很短的激發(fā)壽命。

四種染料呈現(xiàn)不同的熒光顏色，DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細胞多色彩熒光成像分析和流式細胞術提供了一種便捷的工具。DiO和DiI分別用標準FITC和TRITC濾光器檢測，可結合使用。其中，DiI及其衍生物由于極其低的細胞毒性，應用為廣泛。不僅普遍用于活體和固定組織及細胞的神經(jīng)元逆行性和順行性示蹤分析，還可以用于檢測細胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程的細胞遷移，通過FRAP（熒光光漂白恢復技術）檢測脂質在細胞膜上的擴散過程，檢測細胞毒性，以及標記脂蛋白如LDL和HDL等。

本品以DiI的高氯酸鹽形式提供，英文全名：1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate，CAS NO.41085-99-8，純度≥98%（TLC），適用于熒光檢測研究。

基本特性：

1）同義名：DiI perchlorate; DiIC18(3); 1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate;

2）CAS NO：41085-99-8

3）分子式：C59H97ClN2O4

4）分子量：933.87g/mol

5）純度：≥98%（TLC）

6）溶解性：溶于DMF，DMSO，甲醇

7）外觀：紅色至暗紅色，紫色至深紫色粉末

8）Ex/Em：550/567 nm（inphosphate buffer/SDS pH 7.0）

9）推薦濾光器：Omega-XF108, XF32, Chroma-41002, 31002

10）化學結構圖：

注意事項

1）熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

【注意】以下使用方法僅用作參考，可根據(jù)具體的實驗條件做出調整。

1. 染色液制備

1）儲存液制備：用DMSO或乙醇配置濃度1～5 mM的儲存液。例如，取5mg DiI（Mw：933.87g/mol）溶于1.07ml無水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的儲存液?！咀⒁狻课词褂玫膬Υ嬉悍盅b儲存在-20℃，避免反復凍融。

2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，調整到1～5 μM的工作濃度?！咀⒁狻抗ぷ饕航K濃度需要根據(jù)不同細胞系和實驗體系來優(yōu)化。建議從推薦濃度開始，以10倍范圍為區(qū)間進行有濃度的摸索。

2. 懸浮細胞染色

1）加入適當體積的染色工作液重懸細胞，使其密度為1×106/mL。

2）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞家培養(yǎng)時間不同?？梢?0min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標記結果。

3）孵育結束，按1000～1500 rpm離心5min。

4）去除上清液，之后輕柔加入37℃預熱的生長培養(yǎng)液重懸細胞。

5）再重復3），4）步驟兩次。

3. 貼壁細胞染色

4. 顯微鏡檢測

1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見下表：

5. 流式細胞儀檢測

經(jīng)DiO，DiI，DiD和DiR染色的細胞分別用流式細胞儀的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3或FL4通道檢測。

— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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DiI （DiIC18（3））細胞膜橙紅色熒光探針

DiI （DiIC18（3））細胞膜橙紅色熒光探針